Preparación del montaje húmedo de bacterias para observar su forma y tamaño naturales

Trate de preparar el montaje húmedo de una bacteria, para observar su forma natural, tamaño y disposición en condiciones de vida.

Propósito:

Las células bacterianas se pueden ver de forma fácil y clara cuando se tiñen con manchas, pero en la mayoría de los procesos de tinción, las células mueren y pierden su forma y tamaño natural debido a la fijación por calor, así como a la exposición a sustancias químicas (manchas, ácido y alcohol).

El objetivo de este experimento es observar la forma natural, el tamaño y la disposición de las bacterias en condiciones de vida. La motilidad no se puede observar en el montaje húmedo, ya que las celdas se presionan entre la corredera y el cubreobjetos.

Principio:

En el montaje húmedo, se coloca una gota de la suspensión de bacterias en un portaobjetos, se cubre con un cubreobjetos y se observa con un microscopio compuesto o, preferiblemente, con un microscopio de campo oscuro o de contraste de fase utilizando un objetivo de inmersión en aceite.

Materiales necesarios:

Portaobjetos de vidrio, cubreobjetos, vaselina, aceite de inmersión (aceite de lana de cedro o parafina líquida), cultivo de bacterias (en medio sólido o en suspensión líquida), bucle y microscopio (compuesto, campo oscuro o contraste de fase).

Procedimiento:

1. Una diapositiva se limpia adecuadamente con agua del grifo, de modo que el agua no quede como gotas en su superficie (Figura 5.2).

2. El portaobjetos se seca limpiando con papel absorbente y, posteriormente, moviéndolo sobre la llama o manteniéndolo al sol.

3. Si la bacteria se ha cultivado en un medio sólido (como cultivo inclinado o cultivo en placa), se coloca una gota de agua destilada en el centro del portaobjetos. Un bucle se esteriliza calentándolo sobre una llama a rojo vivo. Se enfría a temperatura ambiente. Luego, asépticamente, una pequeña parte del cultivo de bacterias es raspada por el bucle y transferida a la gota de agua.

Se hace una suspensión de bacterias mezclando suavemente el bucle de bacterias en la gota de agua, de tal manera que la gota no se propague. Si se cultiva en un medio líquido como suspensión, asépticamente, se coloca una gota de la suspensión de bacterias en el centro del portaobjetos directamente, utilizando un bucle esterilizado con llama.

4. Se aplica vaselina o material similar alrededor de la gota, de modo que, cuando el cubreobjetos cubre la gota, se minimiza la evaporación y el efecto de la corriente de aire.

5. Un cubreobjetos se mantiene en una posición inclinada cerca de la gota de suspensión de bacterias con un borde tocando el portaobjetos.

6. Lentamente se baja el deslizamiento de la cubierta, hasta que toca la superficie de la gota.

7. Luego, se libera el cubreobjetos, de modo que la gota de suspensión de bacterias se propaga en todas las direcciones debajo del cubreobjetos. Se debe tener cuidado para que no se forme una burbuja de aire en la suspensión.

8. La diapositiva se recorta en el escenario de un microscopio compuesto y se observa utilizando objetivos de baja potencia y alto secado. Luego, se coloca una gota de aceite de inmersión en el cubreobjetos y se observa con el objetivo de inmersión en aceite del microscopio. Preferiblemente, se debe usar un microscopio de contraste de fase o de campo oscuro para una observación clara.