2 Métodos de técnicas de electroinmunodifusión para antígenos y anticuerpos
En las técnicas de inmunodifusión, el antígeno y el anticuerpo se dejan difundir para formar una línea de precipitina y esto lleva más tiempo (24-72 horas).
Si el movimiento del antígeno y / o del anticuerpo se hace más rápido, la línea de precipitina se formará en muy poco tiempo para que el diagnóstico se pueda hacer rápidamente. Este objetivo se logra moviendo eléctricamente el antígeno y el anticuerpo. Hay muchas variaciones de este principio. Los dos métodos comunes en uso son la inmunoelectroforesis a contracorriente y la electroforesis de cohetes de Laurell.
Inmunoelectroforesis a contracorriente (electroinmunodifusión doble unidimensional):
Dos pozos se cortan en el agar en una diapositiva.
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Un pozo está lleno de antígeno y el otro está lleno de anticuerpos.
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El lado del anticuerpo del agar está conectado al ánodo y el lado del antígeno está conectado al cátodo del aparato de electroforesis.
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Tras la aplicación de electricidad, las moléculas de antígeno y anticuerpo se mueven (debido a sus cargas eléctricas) en el agar bajo la influencia eléctrica.
En un tampón alcalino, la mayoría de los antígenos clínicamente importantes son electronegativos y, por lo tanto, se mueven hacia el ánodo (es decir, hacia el pozo del anticuerpo). Las moléculas de anticuerpo son eléctricamente neutras o débilmente negativas. Normalmente, las moléculas de anticuerpo eléctricamente negativas deberían moverse hacia el ánodo.
Pero el movimiento de los iones hidroneum en el agar durante la electroforesis es muy fuerte y tira de las moléculas de anticuerpo débilmente negativas hacia el cátodo (es decir, hacia el pozo del antígeno). Como las moléculas de antígeno y anticuerpo se mueven en direcciones opuestas, se encuentran entre sí y forman una línea de precipitación entre los dos pocillos. La línea de precipitación es visible en 30 minutos (a diferencia de 24 horas en difusión) y es aproximadamente 10 veces más sensible que la difusión.
La inmunoelectroforesis a contracorriente se utiliza para detectar
a. Antígenos meningocócicos, criptococales y hemofílicos en el líquido cefalorraquídeo y
segundo. Antígeno de superficie de la hepatitis B en el suero.
Electroforesis de cohete de Lauren (electroinmunodifusión única unidimensional):
Esta técnica se utiliza para cuantificar antígenos. El anticuerpo se mezcla con agar fundido y se vierte en un portaobjetos de vidrio. Después de la solidificación, los pocillos se cortan y se llenan con diferentes concentraciones de antígeno.
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Cuando se aplica electricidad, el antígeno se introduce en el agar que contiene anticuerpos. Las líneas de precipitina se forman a lo largo de los márgenes laterales del límite móvil del antígeno. Poco a poco, el antígeno se pierde por precipitación, de modo que su concentración en el borde anterior disminuye y los márgenes laterales convergen para formar un punto afilado. Así, el patrón resultante de precipitación se asemeja a una espiga o cohete.
La distancia de la espiga desde el pozo del antígeno aumenta con el aumento de la concentración de antígeno. Se puede establecer una curva estándar utilizando concentraciones conocidas de antígenos. La concentración de un antígeno de prueba se puede determinar mediante la interpolación de la curva estándar con la distancia del cohete formado.
La sensibilidad de esta técnica es de aproximadamente 0, 5 mg / ml. La técnica de Laurell también se utiliza para detectar antígenos de cryptococcus, meningococcus y hemophilus en líquido cefalorraquídeo (LCR).
