Prueba de Urease en bacterias para determinar su capacidad para hidrolizar la urea (con la figura)

Prueba de Urease en bacterias para descubrir su capacidad para hidrolizar la urea (con la figura)!

Principio:

Algunas bacterias tienen la capacidad de hidrolizar (descomponer en presencia de agua) la urea a NH ₃ y CO ₂, ya que pueden producir la enzima 'ureasa'.

El NH ₃ es alcalino (básico), debido a lo cual aumenta el pH cambiando el color del rojo fenol de amarillo a rosa.

En la prueba de ureasa, las bacterias de prueba se cultivan en inclinaciones de agar que contienen urea y rojo fenol. Si las bacterias tienen la capacidad de hidrolizar la urea, el color del medio cambia de amarillo a rosa. Algunas bacterias pueden producir NH ₃ al descomponer las peptonas en el medio. En tales casos se obtiene un resultado falso positivo.

Materiales necesarios:

Tubos de ensayo, matraz cónico, tapones de algodón, aguja de inoculación, autoclave, mechero Bunsen, cámara de flujo laminar, recipiente, incubadora, aparato de filtración con membrana, agar de urea, colonias aisladas o cultivos puros de bacterias.

Procedimiento:

1. Cinco tubos de ensayo están tapados con algodón, cubiertos con papel artesanal y atados con hilo o banda de goma (Figura 7.15).

2. Los ingredientes del medio de agar de urea (que contiene urea como componente principal) o su polvo preparado (excepto urea) requeridos para 100 ml del medio se pesan y disuelven en 90 ml de agua destilada en un matraz cónico de 250 ml. temblando y girando.

3. Su pH se determina usando un papel de pH o un medidor de pH y se ajusta a 6.9 usando 0.1N HCI si es más o usando 0.1N NaOH si es menos.

4. El matraz se calienta para disolver el agar en el medio completamente.

5. El matraz está tapado con algodón, cubierto con papel artesanal y atado con hilo o banda de goma.

6. Los cinco tubos de ensayo y el matraz cónico que contiene agar de urea (excepto urea) se esterilizan a 121 ° C (presión de 15 psi) durante 15 minutos en un autoclave.

7. Después de la esterilización, se retiran del autoclave y se dejan enfriar durante algún tiempo sin permitir que el medio se solidifique. El enfriamiento del medio evita la condensación y la acumulación de gotitas de agua en las inclinaciones. Si el medio ya ha sido preparado y solidificado durante el almacenamiento, debe licuarse calentándolo cuidadosamente hasta que se derrita por completo.

8. La solución de urea al 20% se prepara disolviendo 20 gramos de urea en 100 ml de agua destilada y se esteriliza con un aparato de filtración de membrana, ya que la urea no se puede esterilizar con calor, ya que se descompone al calentarla.

9. Se mezclan asépticamente 10 ml de la solución de urea esterilizada con 90 ml del medio licuado enfriado esterilizado (se licúa calentando).

10. Antes de que se solidifique, el medio, en estado fundido y caliente, se distribuye asépticamente en los 5 tubos de ensayo esterilizados y tapados con algodón (aproximadamente 20 ml cada uno).

11. Los tubos de ensayo se mantienen en una posición inclinada para enfriar y solidificar el medio, a fin de obtener inclinaciones de urea agar.

12. Las bacterias de prueba se inoculan de forma aséptica, preferiblemente en una cámara de flujo laminar, en los tubos inclinados clavándolos en el extremo y rayándolos en la superficie de los tubos inclinados con la ayuda de una aguja esterilizada con flama. La aguja se esteriliza después de cada inoculación.

13. Los sesgos inoculados se incuban a 37 ° C durante 24 horas en una incubadora.