Técnicas utilizadas en el proyecto del genoma humano

Algunas de las técnicas importantes utilizadas en el proyecto del genoma humano son las siguientes:

(а) La secuenciación de ADN son los métodos de secuenciación para determinar el orden de las bases de nucleótidos (adenina, guanina, citosina y timina) en una molécula de ADN. Hay dos métodos comunes, a saber, la técnica de Maxam Gilbert que utiliza productos químicos para dividir el ADN en fragmentos en bases específicas; o, más comúnmente, la técnica de Sanger.

También se le llama di-desoxi o método de terminación de cadena. Utiliza la ADN polimerasa para hacer nuevas cadenas de ADN, en presencia de terminadores de cadena de di-desoxinucleótidos para detener la cadena al azar a medida que crece. En ambos casos, los fragmentos de ADN se separan según la longitud mediante electroforesis en gel de poliacrilamida. Esto permite leer la secuencia directamente desde el gel.

(b) Empleo de polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (RFLP).

(c) Los cromosomas artificiales de levadura (YAC) son un vector (portador) creado y utilizado en el laboratorio para clonar fragmentos de ADN. Un YAC se construye a partir de las secuencias teloméricas, centroméricas y de origen de replicación necesarias para la replicación en células de levadura. El telómero es el final del cromosoma; el centrómero es la región cromosómica a la que se unen las fibras del huso durante la división celular; y las secuencias de origen de la replicación son los puntos donde comienza la replicación del ADN.

(d) Los cromosomas bacterianos artificiales (BAC, por sus siglas en inglés) son un gran segmento de ADN (100, 000 a 200, 000 pb) de otra especie clonada en bacterias. Después de que el ADN extraño se haya clonado en la bacteria huésped, se pueden hacer muchas copias de él. Es un vector de clonación de inserto grande capaz de manejar grandes segmentos de ADN clonado, típicamente alrededor de 150 kb. Los BAC se pueden propagar en cepas de laboratorio de Escherichia coli. Estos vectores son útiles en la construcción de bibliotecas genómicas para proyectos de secuenciación a escala genómica.

(e) La reacción en cadena de la polimerasa (PCR).

(f) Electroforesis.