Técnicas de ensayo inmunohistoquímico para detectar antígenos tumorales

Los ensayos inmunohistoquímicos se utilizan ampliamente para detectar antígenos tumorales y para clasificar los tipos de células de linfocitos en las secciones de patología quirúrgica.

La muestra de tejido se fija en un portaobjetos de vidrio.

El mAb marcado con enzima (conjugado) se coloca en capas sobre la muestra y se incuba.

yo. Si la muestra tiene un antígeno específico contra el mAb, el conjugado se une al antígeno en la muestra.

Después del lavado, se añade el sustrato y se incuba.

yo. El desarrollo del color denota que, el antígeno específico contra el mAb está presente en la sección del tejido.

ii. En ausencia de antígeno específico, no hay desarrollo de color.

Se lava el portaobjetos y se observa la sección de tejido bajo el microscopio para detectar la presencia de color.

La peroxidasa de rábano picante (HRP) es la enzima comúnmente utilizada en las técnicas inmunohistoquímicas. El sustrato para HRP es peróxido de hidrógeno y diamino-bencidina. La reacción de HRP con diaminobenzidina produce un color negro.

La peroxidasa: la antiperoxidasa (PAP) es otro método utilizado en patología quirúrgica para detectar enzimas y antígenos relacionados con tumores.

Es un método de tres pasos:

Paso 1:

El tejido que se sospecha tiene un antígeno particular se fija a un portaobjetos de vidrio.

El anticuerpo de conejo conocido contra el antígeno en cuestión se cae sobre el tejido (se sospecha que tiene el antígeno) fijado a un portaobjetos de vidrio.

yo. Si el antígeno correspondiente está en el tejido, el anticuerpo se une a él. El portaobjetos se lava después de la incubación.

Paso 2:

La inmunoglobulina anti-conejo (llamada anticuerpo de enlace) se cae en la diapositiva.

yo. Si el primer anticuerpo de conejo está en la diapositiva (unido al antígeno), la inmunoglobulina anti-conejo se une al anticuerpo de conejo. Después de la incubación se lava el portaobjetos.

Pasos 3:

Se elimina un complejo inmunitario, que consiste en anticuerpos de conejo contra la peroxidasa, combinados con la peroxidasa. Este anticuerpo de conejo se unirá a la inmunoglobina anti-conejo (enlace anticuerpo-paso 2) a través de su región Fc. Después de la incubación se lava el portaobjetos.

Finalmente, se añade sustrato de peroxidasa. El sustrato reaccionará con la peroxidasa dando como resultado la formación de un producto coloreado que se ve bajo el microscopio.

yo. La presencia del producto coloreado en el tejido indica la presencia del antígeno correspondiente.

ii. La ausencia del producto coloreado en la diapositiva indica que el antígeno en cuestión está ausente en el tejido.