Inmunofluorescencia utilizada para la detección de antígenos en células
Inmunofluorescencia utilizada para la detección de antígenos en las células.
Coons (1941) introdujo compuestos fluorescentes como inmunoquímicos para detectar antígenos en tejidos.
La inmunofluorescencia se utiliza para la detección de antígenos en células o tejidos (utilizando anticuerpos conocidos), así como para la detección de anticuerpos en suero (utilizando antígenos conocidos). La fluorescencia es la emisión de luz de un color cuando la sustancia se expone a una luz de otro color. Cuando una sustancia fluorescente se excita con una luz de una longitud de onda particular, absorbe la luz y emite una luz de otra longitud de onda.
yo. El isotiocianato de fluoresceína (FITC) tiene un máximo de absorbancia de la luz a 490-495 nm, y emite la luz a 530 nm (color verde).
ii. El isotiocianato de tetrametil rodamina tiene un máximo de absorbancia de la luz a 550 nm y emite luz de color rojo (580 nm).
a. Inmunofluorescencia directa:
Esta técnica se utiliza para detectar antígenos en células o tejidos.
El tejido, que tiene un antígeno desconocido, se fija a un portaobjetos de vidrio.
↓
El antisuero conocido (específico para el antígeno de interés) conjugado con FIT (conocido como conjugado) se coloca en capas sobre el tejido y se incuba.
yo. Si el antígeno de interés está en los tejidos, el conjugado se une al antígeno.
↓
Luego se lava el portaobjetos para eliminar el conjugado no unido.
↓
La diapositiva se ve entonces bajo microscopio fluorescente.
yo. Se verá un color verde brillante si hay antígeno en el tejido.
ii. Si no hay antígeno en el tejido, todo el conjugado se habría lavado durante la etapa de lavado y, en consecuencia, no habrá color verde.
Esta técnica también se utiliza para detectar la presencia de antígenos bacterianos o virales en los tejidos infectados.
segundo. Inmunofluorescencia indirecta:
Esta técnica se utiliza para detectar anticuerpos en el suero.
Las células que contienen antígenos conocidos se fijan al portaobjetos de vidrio.
↓
El suero de prueba se agrega sobre el portaobjetos y se incuba.
yo. Si hay anticuerpos (contra los antígenos en las células) en el suero, los anticuerpos se unirán a los antígenos en las células.
↓
Luego se lava el portaobjetos para eliminar los componentes de suero no unidos.
↓
Inmunoglobulina antihumana conjugada a FITC se agrega y se incuba.
yo. La inmunoglobulina antihumana conjugada con FITC se unirá a los anticuerpos séricos unidos a los antígenos celulares.
↓
Después del lavado, el portaobjetos se observa bajo un microscopio fluorescente.
yo. La presencia de color verde brillante indica que el suero tiene anticuerpos contra los antígenos en las células.
ii. La ausencia de color verde indica la ausencia de anticuerpos séricos contra los antígenos en las células utilizadas.
