Experimento para la identificación de bacterias desconocidas (con la figura)

Experimento para la identificación de bacterias desconocidas!

Principio:

La identificación de bacterias desconocidas es una de las principales responsabilidades de los microbiólogos. Las muestras de sangre, tejidos, alimentos, agua y cosméticos se examinan a diario en laboratorios de todo el mundo para detectar la presencia de microorganismos contaminantes.

Además, las organizaciones industriales están constantemente seleccionando materiales para aislar nuevos microbios que producen antibióticos o microbios que aumentarán el rendimiento de productos comercializables, como vitaminas, solventes y enzimas. Una vez aislados, estos microbios desconocidos deben ser identificados y clasificados.

La ciencia de la clasificación se llama taxonomía y se ocupa de la separación de los organismos vivos en grupos interrelacionados. El Manual de Bacteriología Determinativa de Bergey, octava edición, es la clave taxonómica oficial que contiene los órdenes, familias, géneros y especies de todas las bacterias clasificadas conocidas (Apéndice III).

Con el conocimiento fundamental de los métodos de tinción, las técnicas de aislamiento, la nutrición bacteriana, las actividades bioquímicas y las características de crecimiento de las bacterias, es más fácil identificar cualquier bacteria desconocida.

Las características de algunas bacterias se han dado en la Tabla 7.2. Se pueden identificar otras bacterias de manera similar en función de las observaciones y los resultados obtenidos después de los procedimientos experimentales.

Materiales necesarios:

Portaobjetos, diapositivas de cavidad, placas de petri, matraces cónicos, tapones de algodón, asa de inoculación, autoclave, mechero Bunsen, cámara de flujo laminar, recipiente, incubadora, caldo nutriente, agar nutriente, reactivos de tinción de gram, medios y reactivos para pruebas bioquímicas, microscopio compuesto Colonias aisladas o cultivos puros de bacterias.

Procedimiento:

1. Se realiza tinción de Gram de las bacterias desconocidas. Además de la tinción de gram, también se registra su morfología y disposición. La prueba de motilidad de las bacterias se determina mediante la preparación de gotas colgantes (Figura 7.25).

2. Usando una técnica de inoculación estéril, las bacterias se inoculan en dos inclinaciones de agar nutritivas, un tubo de caldo de nutrientes y una placa de agar nutritivo mediante la inoculación de rayas. Después de la incubación, se utiliza un cultivo inclinado para determinar las características culturales de las bacterias desconocidas.

El segundo se utiliza como subcultivo de stock, en caso de que sea necesario repetir cualquiera de las pruebas. Las características de crecimiento también se observan en el tubo de caldo y las características de la colonia en la placa.

3. Ejerciendo el cuidado en una técnica estéril, para no contaminar los cultivos y obtener resultados falsos, las bacterias se inoculan en los medios respectivos para llevar a cabo las diferentes pruebas bioquímicas.

4. Los medios inoculados se incuban a las temperaturas requeridas durante el tiempo requerido.

Observaciones:

1. En la tinción de gram, además de la reacción de gram, también se registra la morfología y la disposición de las bacterias.

2. Se anotan las características culturales de las bacterias en el caldo de nutrientes, en inclinación de agar y en placa de agar de nutrientes.

3. Se registran los resultados de las reacciones bioquímicas.

Interpretación de resultados:

1. Utilizando los datos registrados anteriormente (por ejemplo, consulte la Tabla 7.1) y con la ayuda del Manual de Bacteriología Determinativa de Bergey, la bacteria se identifica en cuanto a su género y especie. Debe tenerse en cuenta que los resultados pueden variar según las cepas de cada especie utilizada y el tiempo durante el cual la bacteria se ha mantenido en el cultivo de reserva.

Los resultados observados pueden no ser completamente idénticos a los resultados esperados. Por ello, se eligen las bacterias que mejor se ajustan a los resultados. Las características identificativas de pocas bacterias se han dado en la Tabla 7.2.

2. Alternativamente, utilizando los datos registrados anteriormente, se proporcionan números de código para los resultados registrados (consulte la Tabla 7.3) y las bacterias se identifican fácilmente con la ayuda del programa de computadora disponible para Apple II, IBM PC o TRS-80.

El programa está diseñado para identificar las bacterias desconocidas sobre la base del porcentaje de similitud entre las bacterias desconocidas y las bacterias conocidas con respecto a las observaciones anteriores.

Para iniciar el programa para Apple II o IBM-PC:

(a) El disco está insertado en el disco izquierdo.

(b) La computadora está encendida.

(c) Luego de las instrucciones del programa, escriba las respuestas, el número de bacterias desconocidas y los números de código a medida que aparecen las preguntas en la pantalla.

Para iniciar el programa para el TRS-80:

(una) La computadora está encendida.

(segundo) El disco se inserta en la unidad inferior.

(do) Se presiona el botón naranja.

(re) Cuando se le pregunta, se ingresa "fecha (MM / DD / AA)".

(mi) El botón naranja se presiona de nuevo.

(f) Las instrucciones del programa se siguen escribiendo las respuestas, el número de bacterias desconocidas y los números de código según aparecen las preguntas en la pantalla.

E. Métodos automatizados de identificación de bacterias desconocidas:

La identificación de bacterias desconocidas por el método manual mediante reacciones de tinción, pruebas de motilidad, características culturales y pruebas bioquímicas es un proceso engorroso, prolongado y que requiere mucho tiempo. Para hacer el proceso fácil y corto, se han desarrollado métodos automáticos.

Básicamente, estos métodos utilizan las mismas pruebas bioquímicas que los métodos manuales, pero aquí se realizan de forma automática y la interpretación se realiza con un programa asistido por computadora.

Dos de estos sistemas utilizados en la actualidad para la identificación automática de bacterias se dan a continuación:

1. Sistema de API MINI

2. Sistema VITEK 2

F. Confirmación adicional:

(1) Pruebas serológicas:

Se pueden realizar pruebas serológicas para una confirmación adicional de las bacterias identificadas. A una suspensión de las bacterias identificadas (por ejemplo, X), se mezcla una gota del antisuero (anti-X) contra esa bacteria. Si da lugar a la formación de grumos o precipitados (complejo X-anti-X), se confirma la identificación.

Los antisueros para diferentes bacterias están disponibles comercialmente. Se producen comercialmente en diferentes laboratorios. El antisuero de bacterias particulares se produce inyectando células muertas o atenuadas de esas bacterias (por ejemplo, X) en un animal de laboratorio.

Como mecanismo de defensa, el animal huésped produce anticuerpos (anti-X) contra esa bacteria, que permanece en la sangre. La sangre se extrae de este animal y su suero se aísla mediante técnicas especiales. Este suero, que contiene anticuerpos contra esa bacteria, se llama el antisuero de esa bacteria.

(2) Prueba de PCR:

La prueba de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es un método molecular rápido para la confirmación de las bacterias identificadas. Esta técnica se utiliza con mucha frecuencia para la detección rápida y precisa de diversas bacterias y virus.