3 Clasificaciones de Técnicas de Aglutinación

Los tres tipos en que se clasifican las técnicas de aglutinación de las células son: 1. aglutinación directa, 2. aglutinación indirecta (pasiva) y 3. aglutinación inversa (pasiva).

1. Ensayo de aglutinación directa:

Las células (como bacterias, hongos y eritrocitos) y antígenos en partículas insolubles pueden aglutinarse directamente por sus anticuerpos específicos. El anticuerpo tiene dos brazos Fab con los que puede unirse a antígenos en dos células. Del mismo modo, muchas moléculas de anticuerpo se unen con varias células para formar una red.

Esta formación de celosía se ve visualmente en grupos. Por lo tanto, la formación de grupos indica la presencia de unión antígeno-anticuerpo. La falta de aglutinación indica la ausencia de reacción antígeno-anticuerpo.

Usos de la prueba de aglutinación directa:

a. Identificación de microbios:

Las colonias bacterianas que crecen en medios de cultivo se identifican utilizando antisueros conocidos contra microbios. El antisuero antimicrobiano que produce una aglutinación visible identifica a las bacterias.

segundo. Diagnóstico de infecciones microbianas mediante la detección de la presencia de anticuerpos contra microbios en el suero. Los antígenos microbianos conocidos se mezclan con el suero del paciente y la aparición de aglutinación indica la presencia de anticuerpos séricos contra el microbio.

do. ABO agrupación en sangre de eritrocitos humanos (mediante el uso de antisueros).

Las pruebas de aglutinación se realizan en el portaobjetos (prueba de aglutinación de portaobjetos) o en tubos (prueba de aglutinación de tubos).

yo. La prueba de aglutinación en portaobjetos es simple y fácil de realizar y solo necesita unos minutos para realizar la prueba.

ii. La prueba de aglutinación en tubo se usa para cuantificar la cantidad de anticuerpos del suero contra un microbio diluyendo en serie el suero y luego mezclando los sueros diluidos con una cantidad constante de antígenos microbianos. Después de la incubación apropiada, la dilución más alta del suero que muestra aglutinación visible se toma como el título del suero (por ejemplo, prueba de tubo de Widal, prueba de tubo de Brucella). El título refleja la concentración de anticuerpos en el suero; más alto es el título, más es la concentración de anticuerpos.

Las pruebas de deslizamiento para detectar anticuerpos séricos contra agentes infecciosos se utilizan como pruebas de detección iniciales. Los sueros de las pruebas de deslizamiento positivos deben volver a analizarse mediante pruebas en tubo para confirmar los resultados de la prueba de deslizamiento. La prueba de deslizamiento puede dar resultados engañosos, especialmente con niveles de anticuerpos séricos muy altos (por ejemplo, fenómeno de prozona con anticuerpos contra brucella).

Hay mucha variabilidad intrínseca en los sistemas de prueba de aglutinación. Por lo tanto, cuando los valores de título de suero de un paciente se verifican en dos ocasiones, la diferencia entre los valores de título es significativa, solo cuando los valores de título difieren en al menos dos diluciones dobles [o diferencia en dos tubos (cuatro veces el primer valor) ] (p. ej., en la prueba de Widal Tube, el suero se diluye en dos pliegues: 1 en 20, 1 en 40, 1 en 80, 1 en 160, 1 en 320 y 1 en 640. Si un paciente tiene una primera prueba de Widal título de 1 en 160, el segundo título de prueba de Widal es significativo si es 1 en 640 o más de 1 en 640.)

Prueba de anticuerpos heterófilos:

(A menudo denominada prueba de punto único) La prueba de anticuerpos heterófilos es una prueba de hemaglutinación para la detección de anticuerpos contra el virus de Epstein Barr (EB) que causa la enfermedad infecciosa de la mononucleosis. Los anticuerpos IgM formados durante la mononucleosis infecciosa reaccionan de forma cruzada con antígenos de superficie de RBC equinos (probablemente debido a la similitud antigénica entre el virus EB y las proteínas de superficie de RBC equinos) y causan hemaglutinación.

Prueba de aglutinación indirecta (pasiva):

En la prueba de aglutinación indirecta, los antígenos solubles conocidos se aplican a otras células (p. Ej., Eritrocitos de oveja o pavo) o partículas inertes (p. Ej., Látex, bentonita, carbón vegetal, poliestireno), que actúan como portadores pasivos de antígenos.

Muchos antígenos se pueden recubrir sobre los eritrocitos directamente o después de tratar los eritrocitos con formalina, ácido tánico o glutaraldelyde. Las ventajas de usar eritrocitos para el recubrimiento son su fácil disponibilidad y capacidad de almacenamiento. Además estas pruebas son altamente sensibles.

El suero de prueba se mezcla con eritrocitos o látex conocidos recubiertos con antígeno.

Si el suero de prueba tiene anticuerpos, los eritrocitos o las partículas de látex se aglutinan y producen grumos visibles.

Ensayo de hemaglutinación:

Las pruebas de hemaglutinación son simples y fáciles de realizar. Se pueden realizar pruebas tanto cualitativas como cuantitativas con la técnica de hemaglutinación.

El suero de prueba se diluye en serie en una solución diluyente en los pocillos de una placa de microtitulación.

Los glóbulos rojos recubiertos con un antígeno conocido se agregan en volúmenes iguales a todos los pocillos. Se utilizan controles positivos apropiados, controles negativos y controles de reactivos. La placa se agita bien y se incuba en un lugar libre de vibraciones.

Después de la incubación, la placa se lee a simple vista para aglutinación.

Reacción positiva:

Los pocillos con aglutinación indican la unión de los eritrocitos recubiertos con antígeno con los anticuerpos correspondientes en el suero de prueba. El fondo del pozo aglutinado se describe para tener una apariencia de alfombra.

Reacción negativa:

En los pozos donde no hay unión antígeno-anticuerpo, no se produce aglutinación de los glóbulos rojos. Debido a la gravitación, los glóbulos rojos se establecen en la parte inferior de los pozos y dan una apariencia de "botón", en la que el borde del "botón" es nítido y regular.

Título de anticuerpo del suero de prueba:

La dilución del suero que proporciona una aglutinación del 50 por ciento en comparación con el pozo que muestra una aglutinación completa (100 por ciento) es el título de anticuerpos del suero de prueba. Los kits de hemaglutinación están disponibles para la detección de anticuerpos contra el virus de la hepatitis B, el VIH, la tiroglobulina, etc.

Aglutinación de partículas de gelatina:

Las partículas de gelatina son alternativas a los eritrocitos para las pruebas de aglutinación de partículas. Las partículas de gelatina especiales (alrededor de 3 µm de diámetro) tienen una superficie altamente hidrófila y, por lo tanto, no hay una unión no específica de los materiales presentes en la muestra. Las partículas de gelatina se fabrican por separación de fase y reticulación tridimensional a 40 ° C. Las partículas resultantes se fijan con formaldehído o gluteraldehído.

Las partículas de gelatina no tienen antigenicidad y, por lo tanto, están libres de los problemas asociados con los ensayos de hemaglutinación (como los anticuerpos heterófilos, que pueden reaccionar no específicamente con los eritrocitos y dar aglutinaciones falsas positivas en los ensayos de hemaglutinación).

Ensayo de aglutinación de látex:

Aparte de los eritrocitos y la gelatina, algunas otras partículas también pueden usarse para transportar antígenos en su superficie. Dichas partículas recubiertas con antígeno se aglutinarán cuando se mezclen con anticuerpos específicos. Los antígenos de proteínas y polisacáridos pueden recubrirse sobre partículas de látex. Estas partículas recubiertas de antígeno se aglutinarán en presencia de anticuerpos.

Ensayo de hemaglutinación pasiva inversa:

En los ensayos de hemaglutinación pasiva inversa, los RBC están recubiertos con anticuerpos conocidos. Estos kits se utilizan para detectar los antígenos en las muestras de prueba, como HB s Ag en el suero.

Prueba de Rose-Waaller:

Esta es una prueba de hemaglutinación pasiva para detectar el factor reumatoide. Una de las características del factor reumatoide humano es que puede unirse a la IgG humana así como a la IgG de conejo. Los eritrocitos de oveja están recubiertos con cantidades subaglutinantes de anticuerpos IgG anti-ovejas (criados en conejo). Los factores reumatoides aglutinan eritrocitos de oveja recubiertos con IgG anti-oveja de conejo.

Prueba de floculación:

La floculación es otro tipo de ensayo de formación de complejo antígeno-anticuerpo, utilizado para detectar y cuantificar los anticuerpos. En contraste con la aglutinación y la precipitación (en la que los complejos antígeno-anticuerpo se depositan en el fondo del tubo), en la prueba de floculación los complejos antígeno-anticuerpo se agregan y permanecen en suspensión como flóculos y los resultados se leen al microscopio. Esta técnica se utiliza en la prueba VDRL (prueba de laboratorio de investigación de enfermedades venéreas) para detectar anticuerpos contra Treponema pallidum, la bacteria que causa la sífilis.

Hemaglutinación Viral

La hemaglutinación viral es una categoría especial de aglutinación de eritrocitos, que no implica una reacción antígeno-anticuerpo. Ciertos virus se unen a las proteínas superficiales de los glóbulos rojos y esta unión conduce a la aglutinación espontánea de los glóbulos rojos.

La aglutinación espontánea de glóbulos rojos por un virus puede prevenirse mediante anticuerpos antivirales específicos. Los anticuerpos contra el virus se unen a los antígenos de la superficie viral e impiden la interacción del virus y los glóbulos rojos y, por consiguiente, los glóbulos rojos no se aglutinan. Se llama ensayo de inhibición de la hemaglutinación viral y se utiliza para cuantificar anticuerpos virales en el suero de los pacientes.

Prueba de aglutininas frías:

Los anticuerpos formados durante ciertas infecciones (especialmente Mycoplasma pneumoniae) y las enfermedades autoinmunes tienen una capacidad particular para aglutinar los glóbulos rojos a 4 ° C. Estos anticuerpos se llaman aglutininas frías.

Las diluciones en serie del suero del paciente se incuban con glóbulos rojos al 1 por ciento a 4 ° C durante la noche.

Los tubos son examinados por la presencia de aglutinación. Si hay aglutinación, los tubos se vuelven a incubar a 37 ° C.

La desaglutinación de los glóbulos rojos a 37 ° C indica que el suero tiene aglutininas frías. El ensayo de aglutinina fría se utiliza para diagnosticar la infección por Mycoplasma pneumoniae. 50 a 80 por ciento de los pacientes con infección aguda por Mycoplasma pneumoniae tienen aglutinina fría que pertenece al tipo IgM.