29 El laboratorio de microbiología de todos los equipos debería tener

Trate de estudiar el principio de funcionamiento y la operación de los equipos utilizados en el laboratorio de microbiología. Un laboratorio de microbiología moderno debe estar equipado con el siguiente equipo.

1. Horno de aire caliente para esterilización:

Se utiliza para la esterilización de artículos de vidrio, como tubos de ensayo, pipetas y placas de Petri. Dicha esterilización en seco se hace solo para la cristalería. Las sustancias líquidas, como los medios preparados y las soluciones salinas, no se pueden esterilizar en el horno, ya que pierden agua debido a la evaporación.

Los artículos de vidrio se esterilizan a 180 ° C durante 3 horas. Un horno (Figura 3.2) tiene un control de termostato, mediante el cual se puede obtener la temperatura constante requerida por prueba y error. La lectura del cuadrante del termostato es aproximada y la temperatura exacta se lee introduciendo un termómetro en el horno o en un termómetro en forma de L incorporado.

En un horno moderno (Figura 3.3), hay una pantalla digital de temperatura y un controlador de temperatura automático para configurar la temperatura deseada fácilmente. El tiempo se establece mediante un temporizador digital. Después de cargar la cristalería, la puerta se cierra y el horno se enciende.

Se ajusta la temperatura requerida. Una vez que el horno alcanza la temperatura establecida, el tiempo requerido de esterilización se ajusta en el temporizador. El horno se apaga automáticamente después del tiempo establecido. El horno se abre, solo después de que su temperatura desciende cerca de la temperatura ambiente. De lo contrario, si se abre la puerta, mientras el interior del horno aún está muy caliente, el aire frío puede precipitarse y agrietar la cristalería.

2. Horno de secado:

Para la preparación de ciertos reactivos, los artículos de vidrio, después de una limpieza y enjuague adecuados con agua destilada, deben secarse. Se secan dentro del horno de secado a 100 ° C hasta que la cristalería se seque completamente.

3. Autoclave:

Autoclave es el núcleo de un laboratorio de microbiología. Se utiliza no solo para esterilizar sustancias líquidas como medios preparados y soluciones salinas (diluyentes), sino también para esterilizar artículos de vidrio cuando sea necesario.

Tiene el mismo principio de funcionamiento que una olla a presión doméstica. La temperatura máxima que se puede obtener al hervir el agua en un recipiente abierto es de 100 ° C (punto de ebullición del agua).

Esta temperatura es suficiente para matar solo a los formadores sin esporas, pero es difícil matar a las bacterias formadoras de esporas a esta temperatura, ya que se escapan formando esporas resistentes al calor. Lleva mucho tiempo matar las esporas a esta temperatura.

Por otro lado, cuando el agua se hierve en un recipiente cerrado, debido al aumento de la presión en su interior, el punto de ebullición se eleva y se puede obtener una temperatura de vapor muy superior a 100 ° C. Esta alta temperatura es necesaria para matar todas las bacterias, incluidos los formadores de esporas resistentes al calor. La temperatura del vapor aumenta con el aumento de la presión del vapor (Tabla 3.1).

Tabla 3.1: Temperaturas alcanzables a diferentes presiones de vapor:

Al operar un autoclave vertical estándar, (Figura 3.4) se vierte suficiente agua en él. Si el agua es demasiado baja, la parte inferior del autoclave se seca durante el calentamiento y el calentamiento adicional lo daña.

Si tiene un elemento de calentamiento de agua incorporado, (Figura 3.5) el nivel de agua debe mantenerse por encima del elemento. Por otro lado, si hay demasiada agua, lleva mucho tiempo alcanzar la temperatura requerida.

Los materiales a esterilizar se cubren con papel artesanal y se colocan en un marco de aluminio o madera que se mantiene en la parte inferior del autoclave; de ​​lo contrario, si los materiales permanecen medio sumergidos o flotando, se caen durante la ebullición y puede entrar agua. El autoclave está cerrado perfectamente herméticamente, manteniendo la válvula de liberación de vapor abierta.

Luego, se calienta a la llama o por el elemento de calefacción incorporado. Se debe permitir que el aire dentro del autoclave escape completamente a través de esta válvula. Cuando se ve que el vapor de agua se escapa a través de la válvula, se cierra.

La temperatura y la presión en el interior siguen aumentando. El aumento de presión se observa en el dial de presión. Por lo general, la esterilización se realiza a 121 ° C (una presión de 15 libras por pulgada cuadrada, es decir, 15 psi) durante 15 minutos. El tiempo requerido se considera desde el punto en que se alcanza la temperatura-presión requerida.

Una vez que se alcanza la temperatura-presión requerida, se mantiene controlando la fuente de calentamiento. Después del tiempo especificado (15 minutos), se interrumpe el calentamiento y la válvula de liberación de vapor se abre ligeramente. Si se abre por completo inmediatamente, debido a una caída repentina en la presión, los líquidos pueden derramarse de los contenedores.

Gradualmente, la liberación de vapor se abre más y más, para permitir que todo el vapor escape. El autoclave se abre solo después de que la presión vuelva a la presión atmosférica normal (0 psi). El autoclave nunca debe abrirse, cuando todavía hay presión en el interior. Los materiales esterilizados en caliente se eliminan sujetándolos con un paño limpio o con guantes de mano recubiertos con asbesto.

En el caso de un autoclave horizontal con camisa de vapor, una caldera produce el vapor (Figura 3.6). Se libera a una presión designada, en la cámara exterior (chaqueta). Se deja escapar el aire y luego se cierra la válvula de liberación de vapor.

La camisa caliente calienta la cámara interior, calentando así los materiales a esterilizar. Esto evita la condensación de vapor sobre los materiales. Ahora, el vapor a presión se libera de la camisa a la cámara interior y se permite que el aire escape de ella.

Entonces, su válvula de liberación de vapor se cierra. El vapor a presión en la cámara interior alcanza temperaturas superiores a 100 ° C, que pueden esterilizar los materiales que se mantienen en su interior. El autoclave también tiene un sistema de cierre automático, es decir, a menos que la temperatura y la presión bajen cerca de las condiciones ambientales, la puerta no se puede abrir.

Además del dial de presión, también tiene un dial de temperatura separado para indicar la temperatura dentro de la cámara interior. Además, el autoclave mantiene la temperatura y la presión automáticamente y se apaga después del tiempo establecido de esterilización.

4. Incubadora microbiológica:

El crecimiento profuso de microbios se obtiene en el laboratorio al cultivarlos a temperaturas adecuadas. Esto se hace inoculando el microbio deseado en un medio de cultivo adecuado y luego incubándolo a la temperatura óptima para su crecimiento.

La incubación se realiza en una incubadora (Figura 3.7), que mantiene una temperatura constante específicamente adecuada para el crecimiento de un microbio específico. Como la mayoría de los microbios patógenos para el hombre crecen abundantemente a la temperatura corporal del ser humano normal (es decir, a 37 ° C), la temperatura habitual de incubación es de 37 ° C.

La incubadora tiene un termostato, que mantiene una temperatura constante, ajustada según los requisitos. La lectura de temperatura en el termostato es aproximada. La temperatura precisa se puede ver en el termómetro fijado en la incubadora. La temperatura exacta, según el requisito, se establece girando la perilla del termostato por prueba y error y anotando la temperatura en el termómetro.

La mayoría de las incubadoras modernas (Figura 3.8) son programables, que no necesitan ajustes de temperatura de prueba y error. Aquí, el operador establece la temperatura deseada y el período de tiempo requerido.

La incubadora lo mantiene automáticamente en consecuencia. La humedad se suministra al colocar un vaso de agua en la incubadora durante el período de crecimiento. Un ambiente húmedo retarda la deshidratación de los medios y, por lo tanto, evita resultados experimentales falsos.

5. Incubadora de DBO (incubadora de baja temperatura):

Algunos microbios deben cultivarse a temperaturas más bajas para fines específicos. La incubadora de baja temperatura BOD (Figura 3.9), que puede mantener temperaturas desde 50 ° C hasta tan solo 2-3 ° C se usa para la incubación en tales casos.

La temperatura constante deseada se ajusta girando la perilla del termostato. La rotación de la perilla del termostato mueve una aguja en un dial que muestra la temperatura aproximada. Se obtiene la temperatura requerida exacta, girando el botón con precisión por prueba y error y anotando la temperatura en el termómetro fijado en la incubadora.

La mayoría de las incubadoras modernas de DBO (Figura 3.10) son programables, las cuales no necesitan ajustes de temperatura de prueba y error. Aquí, el operador establece la temperatura deseada y el período de tiempo requerido. La incubadora lo mantiene automáticamente en consecuencia.

6. Nevera (Refrigerador):

Sirve como depósito de productos químicos termo lábiles, soluciones, antibióticos, sueros y reactivos bioquímicos a temperaturas más frías e incluso a temperaturas bajo cero (a menos de 0 ° C). También se almacenan en él cultivos madre de bacterias entre los períodos de subcultivo. También se utiliza para el almacenamiento de medios esterilizados, a fin de evitar su deshidratación.

7. Nevera profunda:

Se utiliza para almacenar productos químicos y conservar muestras a temperaturas muy bajas a cero.

8. Balance electrónico de la parte superior de la bandeja:

Se utiliza para pesar grandes cantidades de medios y otros productos químicos, donde el pesaje preciso no tiene mucha importancia.

9. Balanza analítica electrónica:

Se utiliza para pesar pequeñas cantidades de productos químicos y muestras de forma precisa y rápida.

10. Balance analítico de doble bandeja:

Se utiliza para pesar productos químicos y muestras con precisión. El pesaje lleva más tiempo, por lo que solo se utiliza en casos de emergencia.

11. Planta de agua destilada:

El agua se utiliza en la preparación de medios y reactivos. Si los medios se preparan con agua del grifo, las impurezas químicas presentes en él pueden interferir con el crecimiento de los microorganismos en los medios. Además, cuanto más alto es el contenido de bacterias de los medios, más largo es el tiempo requerido para su esterilización y mayor es la posibilidad de supervivencia de algunas bacterias.

El agua destilada, aunque no está libre de bacterias, contiene menos cantidad de bacterias. Es por eso que; Se prefiere en la preparación de medios microbiológicos. También se utiliza en la preparación de reactivos, ya que las impurezas químicas presentes en el agua del grifo pueden interferir con el funcionamiento adecuado de los reactivos químicos.

Como la fabricación de agua destilada por el condensador Liebig es un proceso que lleva tiempo, en la mayoría de los laboratorios se prepara mediante "plantas de agua destilada". Por lo general, una planta de agua destilada está hecha de acero o latón. También se le llama agua destilada todavía.

Tiene una entrada que se conecta al grifo de agua y dos salidas, una para que el agua destilada caiga en un recipiente y la otra para el flujo del agua de refrigeración caliente hacia el fregadero. El alambique está instalado en la pared. Se calienta mediante elementos de calefacción eléctricos incorporados (calentador de inmersión).

El alambique funciona de manera eficiente, cuando el flujo de agua se ajusta de manera que la temperatura del agua de enfriamiento que fluye desde el alambique al fregadero no sea ni demasiado alta ni demasiado baja, es decir, que salga agua tibia. El agua destilada puede contener trazas de metales corroídos del contenedor de acero o latón.

Para obtener agua destilada libre de metal, se usa un aparato de destilación de vidrio y aún mejor es un aparato de destilación de cuarzo. Sin embargo, para un laboratorio de microbiología, un aparato de destilación de acero o vidrio es suficiente. Para análisis de precisión, se utiliza agua destilada doble o triple.

12. Sistema de purificación de agua ultrapura:

Para trabajos analíticos de precisión, hoy en día, en lugar de usar agua destilada doble o triple, se usa agua microfiltrada. En caso de agua destilada, existe la posibilidad de que pocas sustancias volátiles presentes en el agua se volatilicen durante el calentamiento del agua y luego se condensen en el agua destilada recogida.

Por lo tanto, puede haber trazas de tales sustancias en el agua destilada. Para superar esto, se utiliza agua ultrapura. Aquí, se permite que el agua pase a través de poros microscópicos muy finos, que retienen la partícula microscópica suspendida incluyendo los microbios.

Luego, el agua pasa a través de dos columnas de resinas de intercambio iónico. La resina de intercambio aniónico adsorbe los subtítulos presentes en el agua, mientras que la resina de intercambio aniónico adsorbe los aniones. El agua que sale es extremadamente pura.

13. Homogeneizador:

Para el análisis microbiológico, las muestras líquidas se usan directamente, mientras que las muestras sólidas deben mezclarse bien con diluyentes (generalmente solución salina fisiológica), para obtener una suspensión homogénea de bacterias. Se supone que esta suspensión contiene bacterias de manera homogénea.

La mezcla de muestras sólidas y diluyentes se realiza mediante un homogeneizador, en el que un motor hace girar un impulsor con cuchillas afiladas a alta velocidad dentro de la copa cerrada del homogeneizador que contiene la muestra y los diluyentes. Dispone de un regulador de velocidad para controlar la velocidad de rotación del impulsor.

En algunos laboratorios, la mezcla se realiza manualmente con un mortero y un mortero esterilizados. En los laboratorios modernos, se utiliza una bolsa desechable, dentro de la cual la muestra sólida y los diluyentes líquidos se colocan de forma aséptica y se mezclan mecánicamente mediante la acción peristáltica de una máquina en la bolsa. Esta máquina se llama stomacher.

14. Medidor de pH:

Un medidor de pH es un instrumento para determinar el pH de medios líquidos, muestras líquidas y tampones. Tiene un electrodo de pH de vidrio. Cuando no esté en uso, debe mantenerse medio sumergido en agua contenida en un pequeño vaso de precipitados y, preferiblemente, debe cubrirse con una campana para evitar la acumulación de polvo en el agua y la pérdida de agua por evaporación.

Antes de su uso, el medidor se calibra utilizando dos tampones estándar de pH conocido. Por lo general, los tampones de pH 4.0, 7.0 y 9.2 están disponibles comercialmente. El instrumento se enciende y se deja durante 30 minutos para que se caliente. La perilla de calibración de temperatura se gira a la temperatura de las soluciones cuyo pH es el medido.

Luego, el electrodo se sumerge en el tampón (pH 7.0). Si la lectura no es 7.00, la perilla de calibración de pH se gira hasta que la lectura es 7.00. Luego, el electrodo se sumerge en otro tampón (pH 4.0 o 9.2).

Si la lectura es igual al pH del búfer utilizado, el instrumento funciona correctamente. De lo contrario, el electrodo se activa sumergiendo en 0.1 N HCl durante 24 horas. Después de la calibración, el pH de las muestras se determina sumergiendo el electrodo en ellas y observando la lectura.

Cada vez, antes de sumergirse en cualquier solución, el electrodo debe enjuagarse con agua destilada. Las muestras no deben contener ningún material pegajoso suspendido, que puede formar un revestimiento en la punta del electrodo y reducir su sensibilidad.

Los medidores de pH del modelo antiguo tienen electrodos dobles (uno de ellos actúa como electrodo de referencia), mientras que los nuevos modelos tienen un electrodo combinado único. Además, para superar el problema de la corrección de temperatura, ahora están disponibles medidores de pH con corrección automática de temperatura.

Aquí, otro 'electrodo de temperatura' también se coloca en la solución junto con el electrodo de pH, que mide la temperatura de la solución y corrige automáticamente la influencia de las variaciones de temperatura.

Medidores de pH sofisticados tienen electrodo de gel único. Tales electrodos tienen muy pocas posibilidades de rotura, ya que están casi completamente encerrados en una carcasa de plástico duro, excepto en la punta. La punta tiene sensores de pH y temperatura.

Además, son fáciles de mantener, ya que no requieren una inmersión constante en agua destilada, ya que la punta del electrodo se cierra con una tapa de plástico que contiene una solución saturada de cloruro de potasio cuando no está en uso. Sin embargo, en la preparación de medios microbiológicos, el pH se determina mediante papeles de pH de rango estrecho y se ajusta al pH requerido mediante la adición de ácidos o álcalis según se requiera.

15. Placa caliente:

La placa caliente se utiliza para calentar productos químicos y reactivos. La placa de calentamiento está hecha de una placa de hierro, que se calienta por un elemento de calentamiento eléctrico desde abajo. El grado de calentamiento requerido es obtenido por un regulador.

16. Baño de agua con agitación:

A veces, se requiere calentamiento a temperaturas muy precisas. Tales temperaturas precisas no se pueden obtener en una incubadora o horno, en el que la temperatura fluctúa, aunque ligeramente. Sin embargo, las temperaturas precisas se pueden mantener en un baño de agua, lo que proporciona una temperatura estable.

Un baño de agua consiste en un recipiente que contiene agua, que se calienta mediante elementos de calefacción eléctricos. La temperatura del agua requerida se obtiene aumentando o disminuyendo la velocidad de calentamiento girando el termostato por prueba y error.

En un baño de agua con agitación, la sustancia se calienta a la temperatura requerida y, al mismo tiempo, se agita constantemente. La agitación se realiza mediante un motor, que gira y mueve los contenedores de un lado a otro en cada rotación. La velocidad de agitación es controlada de nuevo por un regulador. Agitar agita la sustancia y mejora la velocidad del proceso.

La mayoría de los baños de agua modernos son programables y no necesitan ajustes de temperatura de prueba y error. La temperatura del agua deseada se puede mantener durante un período de tiempo deseado programando en consecuencia. Se utiliza para el cultivo de bacterias en medio de caldo a una temperatura específica.

17. Contador de colonias de Quebec:

Al enumerar las bacterias en las muestras, se supone que una sola bacteria da lugar a una única colonia visible, cuando se cultiva en una placa de medio nutriente solidificado. Así, al contar el número de colonias, se puede estimar el número de bacterias en una muestra.

A veces, las colonias son muy pequeñas y están demasiado llenas, lo que dificulta su conteo. El conteo se hace fácil cuando se usa un contador de mano mecánico, llamado contador de colonia de Quebec (Figura 3.11). Divide la placa en varias divisiones cuadradas y las lupas se magnifican 1, 5 veces con una lupa, lo que facilita el conteo.

18. Contador electrónico de colonias:

El contador electrónico de colonias es de dos tipos:

(1) Contador electrónico de colonias de mano y

(2) Contador electrónico de colonias de mesa.

El contador de colonia electrónico de mano es un contador de colonias estilo pluma con un rotulador de tinta. Para el recuento de colonias de bacterias cultivadas en una placa de Petri, se mantiene en una posición invertida, de modo que las colonias son visibles a través de la superficie inferior de la placa de Petri.

Las colonias se marcan tocando la superficie de vidrio de la placa de Petri con la punta de fieltro del contador de colonias. Por lo tanto, cada colonia está marcada por un punto hecho por la tinta de la punta de fieltro en la superficie inferior de la placa de Petri. En un solo movimiento, el contador electrónico de colonias marca, cuenta y confirma con un pitido.

El recuento acumulado de colonias se muestra en una pantalla LED de cuatro dígitos. En el caso de un contador electrónico de colonias de mesa, la placa de Petri que contiene las colonias de bacterias se coloca en un escenario iluminado y la barra de conteo está presionada. El número exacto de colonias se muestra instantáneamente en una lectura digital.

19. Agitador magnético:

En la preparación de soluciones, ciertos productos químicos requieren agitación durante mucho tiempo, para disolverse en ciertos solventes. El agitador magnético se utiliza para disolver dichas sustancias de manera fácil y rápida. Un pequeño imán recubierto de teflón, llamado 'barra de agitación', se coloca en un recipiente que contiene el solvente y el soluto.

Luego, el contenedor se coloca en la plataforma del agitador magnético, debajo del cual un imán gira a alta velocidad por un motor. Atraído por el imán giratorio, el imán recubierto de teflón gira dentro del recipiente y revuelve el contenido. Ahora, el soluto se disuelve rápidamente.

El recubrimiento de teflón evita que el imán reaccione con la solución, que entra en contacto con él. Después de la disolución completa, el imán recubierto de teflón se retira de la solución por medio de un recuperador largo, llamado "recuperador de barra de agitación".

20. Sonicador:

Se utiliza para romper las células utilizando ondas de alta frecuencia.

21. Mezclador de vórtice:

Es un instrumento utilizado para la mezcla completa de líquidos en tubos de ensayo. Tiene un rotor, cuya velocidad puede ser controlada. En la punta del rotor hay una tapa de goma espuma. Cuando se presiona la parte inferior de un tubo de ensayo sobre esta parte superior de goma espuma, el rotor comienza a girar, girando así la parte inferior del tubo de ensayo a alta velocidad.

Debido a la fuerza centrípeta, la solución se mezcla bien. Es particularmente útil durante la dilución en serie en la enumeración de bacterias, que necesita una suspensión homogénea de células bacterianas.

21. Cámara de flujo laminar:

Es una cámara (Figura 3.12) utilizada para la transferencia aséptica de materiales esterilizados, así como para la inoculación de microbios. Las partículas de polvo que flotan en el aire albergan microbios. Estas partículas de polvo cargadas de microbios pueden entrar en los medios esterilizados y contaminarlos cuando se abren durante cortos períodos de tiempo durante la inoculación del microbio o se transfieren de un contenedor a otro.

Para superar esto, cuando la inoculación se realiza al aire libre, el aire del área de inoculación pequeña se esteriliza con la llama de un mechero Bunsen. El aire caliente se vuelve ligero y se mueve hacia arriba, evitando así que las partículas de polvo caigan en el medio durante el corto proceso de apertura.

Para reducir aún más la posibilidad de contaminación por el aire cargado de microbios, se utiliza una cámara de flujo laminar. Es una cámara cuboidal acristalada. Un soplador de aire sopla el aire del entorno y lo pasa a través de un filtro HEPA (filtro de aire de partículas de alta eficiencia), para que esté libre de polvo (libre de microbios).

Este aire libre de microbios pasa a través de la cámara de manera laminar y sale de la cámara a través de la puerta frontal abierta. Este flujo laminar de aire libre de microbios desde la cámara hacia el exterior a través de la puerta abierta evita que el aire exterior ingrese a la cámara.

Por lo tanto, la cámara no se contamina con los microbios presentes en el aire exterior, aunque la puerta se mantiene abierta durante la inoculación o la transferencia de medios. Una lámpara UV instalada dentro de la cámara esteriliza la cámara antes de la operación.

Cuenta con una plataforma de acero inoxidable con disposición para la conexión de tuberías de gas para un quemador Bunsen. Antes de usar, la plataforma se limpia y desinfecta con lysol, se conecta el mechero Bunsen y luego se cierra la puerta de vidrio.

La luz UV se enciende durante 10 minutos para esterilizar el ambiente dentro de la cámara y luego se apaga. La puerta de vidrio nunca debe abrirse cuando la luz UV está encendida, ya que la luz UV tiene un efecto perjudicial sobre la piel y la visión. Se enciende el soplador y luego se abre la puerta de vidrio.

Ahora, el mechero Bunsen está encendido y la transferencia de medios o la inoculación se realizan en la cámara de forma aséptica. Si se manejan microbios extremadamente peligrosos, se utiliza una cámara de flujo laminar con guantes que sobresalen dentro de la cámara desde la puerta de vidrio frontal, ya que la inoculación se debe hacer manteniendo la puerta frontal cerrada.

22. Contador electrónico de células:

Se utiliza para contar directamente el número de bacterias en una muestra líquida dada. Un ejemplo de contador de células electrónico es el 'contador de Coulter'. En este equipo, se permite que una suspensión de células bacterianas pase a través de un orificio diminuto, a través del cual fluye una corriente eléctrica.

La resistencia en el orificio se registra electrónicamente. Cuando una célula pasa a través del orificio, al no ser conductor, aumenta la resistencia momentáneamente. El número de veces que la resistencia aumenta momentáneamente se registra electrónicamente, lo que indica el número de bacterias presentes en la muestra líquida.

23. Aparato de filtración de membrana:

Ciertas sustancias como la urea se desintegran y pierden sus propiedades originales, si se esterilizan con calor. Tales sustancias son esterilizadas por un aparato de filtración de membrana. En este aparato, la solución de la sustancia a esterilizar se filtra a través de un filtro de membrana, lo que no permite que las células bacterianas pasen hacia abajo. La filtración se realiza bajo presión de succión para aumentar la velocidad de filtración (Figura 2.19, página 30).

24. Microscopios:

Se utilizan diferentes tipos de microscopios para la observación visual de morfología, motilidad, tinción y reacciones fluorescentes de bacterias.

25. Computadoras:

Las computadoras son generalmente utilizadas para el análisis de resultados. También se utilizan para la identificación de bacterias fácilmente en pocas horas. De lo contrario, la identificación de bacterias es un proceso tedioso y lleva días juntos para identificar una especie de bacteria.

Las computadoras utilizadas para la identificación de bacterias son Apple II, IBM PC y TRS-80 y sus modernas variantes. Cada personal de investigación del laboratorio debe contar con una computadora, junto con la instalación de Internet.

26. Espectrofotómetro:

Es un instrumento para medir las diferencias en las intensidades de color de las soluciones. Un haz de luz de una longitud de onda particular pasa a través de la solución de prueba y la cantidad de luz absorbida (o transmitida) se mide electrónicamente.

Un simple espectrofotómetro visible puede transmitir luz con longitudes de onda dentro del rango visible, mientras que un espectrofotómetro UV visible puede transmitir luz con longitudes de onda en ultravioleta y en un rango visible. En el laboratorio de microbiología, se utiliza para el recuento directo de bacterias en suspensión y para otros fines.

27. Dispositivos eléctricos:

Una de las razones más importantes es una fluctuación de la tensión eléctrica en el laboratorio, que reduce la longevidad de los equipos y, en ocasiones, los daña. Por lo tanto, todos los equipos sensibles al voltaje deben estar provistos de dispositivos de protección de voltaje como estabilizadores, servoestabilizadores o transformadores de voltaje constante (CVT) según las recomendaciones de los fabricantes de los equipos.

Las computadoras, balanzas y algunos equipos sofisticados deben conectarse a través de una fuente de alimentación ininterrumpida (UPS), ya que cualquier falla en la fuente de alimentación eléctrica durante su operación puede dañar gravemente algunos de sus componentes sensibles.

El laboratorio debe tener un generador de alta capacidad para suministrar corriente eléctrica a todo el laboratorio en caso de una falla eléctrica. Esto se debe a que el fallo de alimentación no solo detiene las actividades del laboratorio, sino que también provoca cambios irreversibles indeseables en las muestras almacenadas en los frigoríficos y refrigeradores.

28. Sistema automático de identificación de bacterias:

Es un instrumento utilizado para la identificación automática de bacterias asistida por computadora (Figuras 3.13 y 3.14). El método convencional de identificación de bacterias es muy largo y engorroso.

Implica principalmente la tinción, la prueba de motilidad, las características culturales, una serie de pruebas bioquímicas y, finalmente, buscar el nombre de la bacteria en el "Manual de Bacteriología Determinativa de Bergey" al hacer coincidir los resultados con los disponibles en el manual. El sistema automático de identificación de bacterias identifica automáticamente las bacterias en muy poco tiempo.

El sistema, como VITEK 2 (Figura 3.14) usa tarjetas desechables. Se requiere una tarjeta para la identificación de una bacteria. El sistema puede alojar una serie de tarjetas, que se pueden colocar en un casete, lo que permite la identificación de varias bacterias a la vez.

Cada tarjeta tiene varias filas de pozos. Por lo general, hay 8 filas de 8 pozos cada una (8X8 = 64 pozos). Los pozos contienen diferentes medios deshidratados requeridos para diferentes pruebas bioquímicas. Se fija un tubo capilar a cada tarjeta, que succiona la suspensión de bacterias a identificar y dispensa en todos los pozos.

Los medios deshidratados en los pozos se hidratan con el líquido de suspensión, lo que permite el crecimiento de las bacterias. Después de un período de incubación prescrito, los cambios de color en todos los pozos se registran automáticamente en el sistema.

Los resultados de los cambios de color van a una computadora conectada al sistema. La computadora compara automáticamente los resultados con los disponibles en su biblioteca para diferentes bacterias y finalmente da el nombre de las bacterias con una probabilidad definida.

Para la identificación, se toman las bacterias dadas, cultivadas como colonias aisladas en una placa o como cultivo puro cultivado en una inclinación. Una porción de la bacteria se transfiere asépticamente a una solución salina estéril en un tubo de ensayo y se prepara una suspensión de la bacteria.

La suspensión debe contener una densidad de bacterias prescrita, según lo determinado por un densitómetro. El tubo de ensayo se fija al casete y una tarjeta se fija cerca de él, de manera que la punta del tubo capilar de succión de la tarjeta permanece profundamente sumergida en la suspensión.

Varios de estos tubos de ensayo y tarjetas se fijan a cada casete, dependiendo de la cantidad de bacterias que se identificarán. El casete se coloca en la cámara de vacío del sistema. Se crea un alto vacío dentro de la cámara, lo que hace que la suspensión de bacterias se aspire a los tubos capilares y se dispense en los pocillos de las tarjetas.

El casete se saca y se coloca dentro de la cámara de incubación y análisis. Aquí, los tubos capilares se cortan y los extremos cortados se sellan automáticamente. Luego, el proceso de incubación comienza a una temperatura prescrita por un período de tiempo prescrito, que es programado por el panel de control. Durante la incubación, cada 15 minutos, cada tarjeta va automáticamente al lector de color, que lee los cambios de color en los pocillos y los registra.

Los resultados registrados van a la computadora, que los compara automáticamente con los disponibles en su biblioteca para diferentes bacterias. Finalmente, da los nombres de las bacterias con probabilidades definidas. Las tarjetas usadas caen en la cámara de eliminación de residuos del sistema para su eliminación y eliminación final después de la esterilización.

Los reconocidos sistemas automáticos de identificación de bacterias son VITEK 2 y API. Mientras que VITEK 2 funciona según el principio anterior, el sistema API (Analytical Profile Indexing) (Figura 3.13) utiliza un método ligeramente diferente para la identificación automática de bacterias, que implica la inoculación manual y la incubación externa.

29. Termociclador de PCR, centrífuga refrigerada, ultra-centrífuga, cromatografía de gases (GC), cromatografía de líquidos de alto rendimiento (HPLC), cromatografía de capa fina (TLC), cromatografía de papel, cromatografía de columna y unidad de electroforesis:

Estos son instrumentos utilizados para el aislamiento, purificación e identificación de sustancias bioquímicas, como el ADN bacteriano, plásmidos, toxinas microbianas, etc. La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una herramienta importante en los métodos basados ​​en ácidos nucleicos. Es un caballo de batalla en los laboratorios modernos de microbiología y biotecnología.